สินค้าเด่น ปี2551

ชุดตรวจสารเมลามีน โปรตีนเทียมที่ปนเปื้อนในนมผง น้ำนม โยเกิร์ต อาหารปศุสัตว์ อาหารแมว-เปียก อาหารสุนัข-แห้ง กลูเต็น-ข้าวสาลี ไข่ไก่ ช็อกโกแลต ไวท์-ช็อกโกแลต ที่บริโภคจำนวนมากแล้วก่ออันตรายเป็นนิ่วในไตจนถึงขั้นเสียชีวิต    >Melamine Plate Kit   >Detection of Melamine Using Commercial Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Technology Journal of Food Protection, Vol. 71, No. 3, 2008, Pages 590–594   หน่วยงานความปลอดภัยด้านอาหาร ประจำสหภาพยุโรป (European food Safety Authority : EFSA) ได้มีการกำหนดค่าในการบริโภคเมลามีนต่อวันของมนุษย์และสัตว์ (Tolerable Daily Intake: TDI ) ในระดับไม่เกิน 0.5 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมของน้ำหนักตัวต่อวัน  ในประเทศไทย ล่าสุดมีประกาศกระทรวงสาธารณสุข เรื่องกำหนดอาหารที่ห้ามผลิต นำเข้า หรือจำหน่าย ตามพ.ร.บ. อาหาร พ.ศ.2522 เพื่อควบคุมผลิตภัณฑ์อาหารต้องไม่ปนเปื้อนสารเมลามีนในปริมาณที่กำหนด แบ่งเป็น 1. นมดัดแปลงสำหรับทารก นมดัดแปลงสูตรต่อเนื่องสำหรับทารกและเด็กเล็ก นมผงชนิดต่างๆ กำหนดให้มีสารเมลามีน (Melamine) และสารในกลุ่มเมลามีน ได้แก่ กรดซัยยานูริก (Cyanuric acid) แอมมีไลด์ (Ammelide) และแอมมีลีน (Ammeline) ปนเปื้อนได้ไม่เกิน 1 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม (ppm) 2. ผลิตภัณฑ์อาหารอื่นๆ เช่น โยเกิร์ต ลูกอม ช็อกโกแลต เป็นต้น ปนเปื้อนได้ไม่เกิน 2.5 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม (ppm) เป็นเกณฑ์ที่ปลอดภัย ที่ร่างกายสามารถขับออกได้เอง     ชุดทดสอบสารเมลามีน Melamine Plate Kit   ความมุ่งหมายเพื่อใช้ Intended use   ชุดทดสอบสารเมลามีน เป็นวิธีทดสอบอิไลซ่า(ELISA) แบบการแข่งขันแบบตรง (direct competitive enzyme-linked immunosorbent assay) สำหรับใช้เพื่อตรวจสอบหาระดับปริมาณของสารเมลามีนในอาหารสัตว์ ชนิดเปียก และ ชนิดแห้ง,กลูเต็น-ข้าวสาลี(และอื่นๆ เช่น นมผง น้ำนม)     หลักการทดสอบ Assay Principles   สารเมลามีนจะถูกสกัดจากตัวอย่างทดสอบที่บดละเอียด ไปอยู่ให้อยู่สารละลายสกัด (extraction solution)   สารเมลามีนที่ผูกติดกับเอ็นไซม์ชี้บอก(Melamine HRP conjugate), สารสกัดของตัวอย่างที่กรองได้ และ สารมาตรฐาน(calibrators) จะถูกหยดลงในหลุมที่เคลือบไว้ด้วยสารเมลามีนแอนตีบอดี (Melamine antibody) เป็นเวลา 30 นาที เพื่อให้สารเมลามีนในสกัด และ สารเมลามีนที่ผูกติดกับเอ็นไซม์ชี้บอก แข่งขันกันเกาะยึดเกาะกับเมลามีนแอนตีบอดีในหลุมทดสอบอย่างสมบูรณ์   เทของเหลวในหลุมทิ้ง แล้วล้างด้วยน้ำยาเจือจาง เพื่อให้สารเมลามีนอิสระ, สารเมลามีนที่ผูกติดกับเอ็นไซม์ชี้บอกที่ไม่เกาะจับกับแอนตีบอดี ออกไป  แล้วเติมสาร Substrate ให้ทำปฏิกิริยาเฉพาะกับเอ็นไซม์ชี้บอก จะเกิดเป็นสีฟ้าขึ้น เป็นเวลา 20 นาทีแล้วหยุดกิริยา อ่านความเข้มของสีในหลุมที่เกิดขึ้น ที่เป็นผลของปฏิกิริยาระหว่างเอ็นไซม์ กับ substrate สีของตัวอย่างทดสอบจะนำไปถูกเปรียบเทียบกับสีของสารมาตรฐาน(calibrators) เพื่อหาจำนวนของสารเมลามีน     น้ำยาและวัตถุที่มีให้  REAGENTS AND MATERIALS PROVIDED   ชุดทดสอบที่บรรจุในหีบห่อจากโรงงานสามารถใช้งานได้จนถึงสิ้นเดือนที่ระบุไว้ เมื่อทำการเก็บรักษาที่  2 –8ºC   • เพลท บรรจุสริป8หลุม จำนวน 12 อัน ที่ห่อในอลูมิเนียมสูญญากาศ ที่มีสารกันความชื้น • สารละลายมาตรฐาน (calibrators) จำนวน 6 ขวด ประกอบด้วย             Melamine calibrators ที่ 0 (ppb)     ขนาด2mL จำนวน 1 ขวด             Melamine calibrators ที่ 20 (ppb)   ขนาด2mL จำนวน 1 ขวด             Melamine calibrators ที่ 50 (ppb)   ขนาด2mL จำนวน 1 ขวด             Melamine calibrators ที่ 100 (ppb) ขนาด2mL จำนวน 1 ขวด             Melamine calibrators ที่ 200 (ppb) ขนาด2mL จำนวน 1 ขวด             Melamine calibrators ที่ 500 (ppb) ขนาด2mL จำนวน 1 ขวด   • สารเมลามีนเอ็นไซม์ชี้บอก (Melamine HRP conjugate)  ขนาด7mL จำนวน 1 ขวด • สารละลาย Substrate ขนาด14mL จำนวน 1 ขวด. • สารละลาย Stop Solution ขนาด14mL จำนวน 1 ขวด ระวังการใช้งาน กรดเกลือHCl 1N • สารละลายบัฟเฟอร์ในการล้าง-มีเข้มข้น5เท่า Wash Buffer Concentrated (5X) โดยการเจือจางในอัตราส่วน 1:5  เช่น ใส่น้ำยา 100 mLลงในขวดเตรียมสาร แล้วเติมน้ำกลั่น400 mL(อาจใช้น้ำประปาได้)   ข้อควรระวัง PRECAUTIONS   1. น้ำยาที่มีให้แต่ละชุด มีความเหมาะสมกันแล้ว ไม่สามารถใช้น้ำยาของผู้ผลิตรายอื่นทดแทน แม้แต่ที่ของ Abraxis Melamine Plate Kit ที่มี lot ต่างกันกันก็ตาม 2. น้ำยาที่มีการเจือจางเกินไป และ ปนเปื้อน จะให้ผลการทดสอบไม่ถูกต้อง 3. อย่าใช้น้ำยาที่หมดอายุ 4. นำน้ำยาจากตู้เย็นมาเตรียมใช้ ที่อุณหภูมิห้องก่อนใช้งาน 5. สารเมลามีนเป็นอันตราย ระมัดระวังในการใช้งาน 6. สารละลาย Stop Solution เป็นกรดเกลือ 1N หลีกเลี่ยงการสัมผัสกับผิวหนัง หากมีอุบัติเหตุ กระเซ็นหก ต้องรีบล้างและทำความสะอาดด้วยน้ำสะอาดเป็นจำนวนมาก 7. ผลการทดสอบที่ได้เป็นแบบคัดกรองเบื้องต้น ซึ่งต้องการยืนยันผลบวกด้วยวิธีอื่นด้วย   อุปกรณ์ที่ต้องเตรียม MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED 1. น้ำกลั่นในห้องปฏิบัติการ หรือ น้ำปราศจากไอออน (deionized water) 2. ไปเปตดูดจ่ายสาร 50 μL พร้อมทริป 3. อปกรณ์ดูดจ่ายสาร 8 ช่อง(Multi-channel pipet 8 channel)ที่ 50 และ 100 μL 4. กระดาษซับ Paper towels 5. เครื่องอ่านผล reader ที่มีตัวกรองแสงที่450 นาโนเมตร (nm) 6. นาฬิกาจับเวลา Timer   วิธีการสกัดตัวอย่างต่างๆ เพื่อการวิเคราะห์ ASSAY APPLICATION (I) วิธีสกัดอในอาหารแมว-เปียก Moist cat food extraction protocol      มีปัจจัยผลคูณโดยการเจือจาง(Dilution factor) เป็น 1:100 1) ปั่นตัวอย่างทดสอบโดยเครื่องปั่นตัวอย่างจนละเอียดเป็นเนื้อเดียวกัน 2) ตักสารตัวอย่างจำนวน 2 กรัม ใส่หลอดทดสอบ เติมสารละลายเมทานอล ( 60% MeOH/water )จำนวน 10 mL แล้วปั่นผสมอย่างแรงด้วย vortex 3) เขย่าด้วยคลื่นความถี่สูง เป็นเวลา 1 นาที 4) ปั่นเขย่าผสมอีกครั้ง เป็นเวลา 1 นาที ตั้งปล่อยไว้ 5 นาที จะเห็นสารแยกชั้นจากกัน 5) นำส่วนใสด้านบนไปปั่น ด้วย Microcentrifuge เป็นเวลา 5นาที ที่ 10,000 รอบต่อนาที (rpm) 6) ใช้กระดาษ G6 glass filterกรองส่วนบน และเก็บส่วนล่างของ filtrate ในขวดสะอาด 7) นำผลึกไปได้เจือจาง 1:20 ในสารSample diluent (0.1 mL + 1.9 ml of 10% MeOH/20 mM PBS) 8) สารเจือจางนี้พร้อมนำไปทดสอบ   ** วิธีการนี้มีค่า Melamine Spiked ที่15 ppm จากการทดสอบกับอาหารแมว-เปียก จำนวน 8 การทดสอบ  มีค่าคืนกลับผล (Recoveries) ระหว่าง 75-117 % (II) วิธีสกัดในอาหารแมว-แห้ง Dry cat food extraction Protocol      มีปัจจัยผลคูณโดยการเจือจาง(Dilution factor) เป็น 1:200 1) ปั่นตัวอย่างทดสอบโดยเครื่องปั่น หรือ เครื่องบดกาแฟจนละเอียดเป็นเนื้อเดียวกัน 2) ตักสารตัวอย่างจำนวน 1 กรัม ใส่หลอดทดสอบ เติมสารละลายเมทานอล( 60% MeOH/water )จำนวน 10 mL 3) ปั่นผสมอย่างแรงด้วย vortex เขย่าด้วยคลื่นความถี่สูง เป็นเวลา 1 นาที ปั่นเขย่าผสมอีกครั้ง เป็นเวลา 1 นาที ตั้งปล่อยไว้ 5 นาที 4) นำส่วนใสด้านบนไปปั่นด้วย Microcentrifuge เป็นเวลา 5นาที ที่ 10,000 รอบต่อนาที (rpm) 5) ใช้กระดาษ G6 glass filterกรองส่วนบน และเก็บส่วนล่างของ filtrate ในขวดสะอาด 6) นำผลึกไปได้เจือจาง 1:20 ในสารSample diluent (0.1 mL + 1.9 ml of 10% MeOH/20 mM PBS) 7) สารเจือจางนี้พร้อมนำไปทดสอบ   (III)  วิธีสกัดจากตัวอย่างอื่นๆ เช่น วิธีสกัดใน นมผง น้ำนม โยเกิร์ต ไข่ไก่ ช็อกโกแลต ไวท์-ช็อกโกแลต โปรดติดต่อบริษัทฯ    วิธีตอนการวิเคราะห์ TEST PROCEDURE (ค่าสารมาตรฐาน Calibrators และ ตัวอย่างควรทดสอบแบบเฉลี่ยคู่กัน duplicate หรือ เฉลี่ยผลจากสามการทดสอบ Tripicate)   1.นำน้ำยา ตัวอย่างทดสอบ ที่ผ่านการสกัด จากตู้เย็นออกมาเตรียมใช้ ใส่น้ำยาล้างที่เจือจางลง 5 เท่าแล้ว ลงในขวด ให้พร้อมใช้ที่อุณหภูมิห้อง 2.แบ่งสตริป ตามจำนวนที่ต้องการ วางบนกรอบจับ micro-well holder (ต้องแน่ใจว่าปิดสตริปที่ยังไม่ใช้ในถุงพร้อมสารดูดความชื้น) 3.ดูดสาร 100 μL ของสารละลายมาตรฐาน Calibrators หรือ 100 μL ของสารละลายตัวอย่างเจือจางของตัวอย่างทดสอบที่ผ่านการสกัด ลงในหลุมของสตริป (ต้องแน่ใจว่าทริปที่ใช้นั้นสะอาด) แล้วใส่ 50 μL of Melamine HRP conjugate ลงในทุกหลุมของสตริป 4. เขย่าเพลท เป็นเวลา 60 วินาที แล้ว ตั้งไว้เป็นเวลา 30 นาที 5. รินหรือเทสารละลายจากในหลุมของสตริปออกลงในอ่างน้ำทิ้ง เติมน้ำยาล้างเจือจาง หรือ อาจใช้น้ำประปา เติมลงในหลุมจนเต็มแต่อย่าให้ล้นหลุมจนหกข้ามกัน แล้วเคาะสะบัดออก ทำซ้ำอีก 3 ครั้ง รวมเป็นมีการล้างครบ4ครั้ง 6.คว่ำสตริปลงบนกระดาษซับ เพื่อเอาน้ำยาล้างออกไป 7. เติม 100 μL ของสารละลาย Substrate ลงในทุกหลุมของสตริป 8. ตั้งไว้เป็นเวลา 20 นาที 9. เติม 100 μL ของสารละลาย Stop Solution ลงในทุกหลุมของสตริป 10.อ่านและบันทึกผลค่าการดูดกลืนแสง absorbance ด้วยเครื่องอ่านผล strip reader ที่มีตัวกรองแสงที่450 นาโนเมตร (nm)         วิธีการอ่านวิเคราะห์ผล RESULTS INTERPRETATION   การอ่านผลแบบกึ่งปริมาณ (Semi-Quantitative Result) โดยการเปรียบเทียบค่าดูดกลืนแสงของตัวอย่างทดสอบ เทียบกับค่าดูดกลืนแสงของสารละลายมาตรฐาน ถ้าค่าดูดกลืนแสงมีค่าน้อยกว่าค่าดูดกลืนแสงของสารละลาย แสดงว่าตัวอย่างทดสอบมีระดับเมลามีนมากกว่าสารระดับของสารละลายมาตรฐาน (calibrator) และหากค่าดูดกลืนแสงมีค่ามากกว่าค่าดูดกลืนแสงของสารละลาย แสดงว่าตัวอย่างทดสอบมีระดับเมลามีนน้อยกว่าสารระดับของสารละลายมาตรฐาน (calibrator)     การอ่านผลแบบหาปริมาณ (Quantitative Result) ต้องสร้างกราฟจากค่าการดูดกลืนแสงของค่าการดูดกลืนแสงของสารละลายมาตรฐาน (calibrator) ในแกน X กับ ระดับความเข้นของสารละลายมาตรฐาน (calibrator) ในรูปค่า log บนแกน Y ค่าบนกระดาษกราฟ semi-log   เมื่อลากเส้นตรงที่ผ่านจุดมาตรฐาน calibrator points จะอาศัยเส้นตรงนี้นำค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่างทดสอบ บนแกน X ไปเทียบเป็นความเข้มข้นสารเมลามีนบนแกน Y   ตัวอย่างทดสอบที่มีค่าการดูดกลืนแสงสูงกว่าค่าต่ำมี่สุดของสารมาตรฐาน หรือ มากกว่าค่าน้อยกว่าค่าสูงสุดของสารมาตรฐาน จะรายงานผลว่า < 20 ppb หรือ >500 ppb หรือ respectively. อนึ่งการหาระดับปริมาณสารจากตัวอย่าง สามารถอ่านได้จาก standard curve แต่เนื่องจากมีการเจือจางตัวอย่าง ดังนั้นผลที่ได้จะต้องคูณด้วย(dilution factor) ความสามารถในการทดสอบ PERFORMANCE DATA ชุดทดสอบ สามารถตรวจหาปริมาณเมลามีนได้ต่ำสุดที่ 10 ppb (หรือ 100ng/mL)  วัตถุดิบ (Matrix)      ช่วงการวิเคราะห์          LOD          % Recovery น้ำนม                     0.20-5.0 ppm          200 ppb        70 – 92 นมผง                     0.10-2.5 ppm          100 ppb          104.9 โยเกิร์ต                        0.16-4.0 ppm          160 ppb       105-140 อื่นๆ โปรดสอบถาม    ความเฉพาะเจาะจง  SPECIFICITY ปฏิกริยาข้าม cross-reactivity ของชุดทดสอบสารเมลามีน แปรผันตามลักษณะสารที่คล้ายกับไตรอะซีน ซึ่งสามารถข้ามรบกวนการทดสอบ จำนวนของเมลามีนที่ตรวจวัดได้ต่ำที่สุดที่90% B/Bo มีปริมาณเมลามีน 10 ppb และ เมลามีนชี้บ่งที่ระดับ400 ppb จะทำให้ค่าการดูดกลืนแสงลดลง50% ของค่าการดูดกลืนแสงของสารมาตรฐานเมลามีนที่ระดับความเข้มข้น 0 ppb (Bo)    Compound           LDD (ppb)         50% B/Bo (ppb) Melamine                   10                           400 Cyanuric Acid            400                     >10,000 Atrazine               >10,000                   >10,000 Diamino Atrazine        0.1                           2   ผลิตภัณฑ์   Abraxis LLC, USA